禽流感病毒HA基因在S2细胞中的表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 史利军

作者： 史利军;张亚兰;尹惠琼;章金刚;李刚

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;HA基因;重组表达;S2细胞

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2010 年 30 卷 10 期

页码： 1330-1333

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中发表的禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)序列设计了1对引物并分别引入NotⅠ和NcoⅠ酶切位点,用PCR方法扩增AIV HA基因片段。回收目的基因片段,并用NotⅠ/NcoⅠ限制性内切酶消化,经纯化后,将其定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5中,构建重组表达载体pMT-HA。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin(杀稻瘟素)进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-HA。提取S2-HA细胞的基因组DNA,PCR检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用终浓度500μmol/L的硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。结果表明,成功构建了重组表达载体pMT-HA,转染细胞经10 mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达HA的果蝇S2细胞株。

分类号： S852.65

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