基于猪轮状病毒完整VP6蛋白的间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 洪雨娟

作者： 洪雨娟;李本强;陶洁;程靖华;唐攀;石迎;刘惠莉

作者机构：

关键词： 猪轮状病毒;间接ELISA;VP6重组蛋白;抗体监测

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2025 年 52 卷 010 期

页码： 4839-4847

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】猪轮状病毒（porcine rotavirus, PoRV）是引起猪腹泻的重要病原之一，近期其感染率再次出现升高趋势，有必要加强临床监测以助力该病的防控。【目的】针对PoRV最新流行株的VP6蛋白，建立一种检测PoRV IgG抗体的间接ELISA方法，为临床PoRV抗体普查提供技术支持。【方法】克隆PoRV优势基因型G9P[23]I5的VP6基因并原核表达与鉴定；以VP6重组蛋白作为捕获抗原，与PoRV阳性猪血清进行方阵滴定试验，优化并确定间接ELISA最优参数并分析其特异性、敏感性和重复性。【结果】建立的ELISA技术流程及参数：VP6抗原最佳包被量0.1μg/孔，4℃包被过夜；5%脱脂奶粉封闭2 h，阳性血清最佳稀释度是1:1 000,37℃孵育1 h;Goat pAb to Pig IgG H&L（HRP）(1:15 000稀释) 37℃孵育1 h，四甲基联苯胺（3,3′,5-5′-tetramethylbenidine, TMB）显色15 min；最佳临界值OD450=0.42，可检测到抗体的最大稀释度为1:8 000；批内和批间系数均小于10%；具有较好的特异性；检测130份临床血清样品，此方法与商品化PoRV ELISA检测试剂盒方法的总体符合率达93.85%；本研究建立间接ELISA方法的灵敏度高于商品化PoRV ELISA检测试剂盒。【结论】本研究建立的PoRV抗体间接ELISA方法具有较高的检测可靠性，适用于临床PoRV抗体的大规模筛查。

分类号： S852.651

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