犬库布病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高岩

作者： 高岩;赵冠宇;李卓昕;仇相书;陈姗;高旭;鲁会军;金宁一

作者机构：

关键词： 犬库布病毒;实时荧光定量PCR;狐狸;3D基因;检测方法

期刊名称： 中国病原生物学杂志

ISSN： 1673-5234

年卷期： 2022 年 001 期

页码： 22-25,30

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 建立可检测狐狸物种中犬库布病毒（CaKoV）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。方法 利用PCR方法扩增狐狸CaKoV的3D基因504bp，将其克隆到pEASY-Blunt载体，构建重组质粒作为阳性质粒，以其为模板建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法，验证其灵敏度、特异性和重复性。结果 建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法检测目的基因在6.12×10~1～6.12×10~8拷贝/μl时呈良好的线性关系，相关系数为0.994，斜率为-4.369，灵敏度6.12×10~1拷贝/μl。该方法对于CPV、CDV和CCV未出现特异性扩增。所有标准曲线在溶解温度为86.49℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测2021年辽宁、山东地区的253份狐狸临床标本，总阳性率为7.91%。结论 建立的CaKoV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法敏感、特异，用于狐狸CaKoV感染的快速检测。

分类号： S852.65

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