GDF9慢病毒载体的构建及其在山羊原代成纤维细胞中的稳定表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 滑留帅

作者： 滑留帅;王璟;陈付英;辛晓玲;楚秋霞;冯亚杰;徐照学;王二耀

作者机构：

关键词： GDF9基因;慢病毒;山羊;原代成纤维细胞

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 09 期

页码： 2566-2572

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在构建山羊生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)慢病毒载体,并使其在山羊原代成纤维细胞中稳定表达。利用全基因合成法克隆了绵羊GDF9基因的CDS全长片段,长约1 362bp,编码453个氨基酸。利用双酶切和连接,将GDF9基因片段亚克隆至慢病毒载体中,构建了过表达GDF9的慢病毒载体。将慢病毒载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞后,获得了滴度为1×106 TU/mL的慢病毒。利用制备的GDF9慢病毒感染山羊原代成纤维细胞后,观察荧光表明,60%以上的细胞能够观察到红色荧光,说明制备的慢病毒对山羊原代成纤维细胞具有较高的感染效率。经过嘌呤霉素筛选后,所有的细胞均能观察到红色荧光。实时荧光定量PCR分析表明,制备的细胞系中GDF9表达水平比对照组高12.17倍,说明成功获得了稳定表达GDF9的山羊成纤维细胞系。本试验结果为进一步研究GDF9基因的生物学功能,以及山羊未来的种质资源创新奠定基础。

分类号： Q78`S827

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