类泛素化蛋白NEDD8单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姚威

作者： 姚威;孙海伟;霍娜;于婉琪;萧飒;陈鸿军

作者机构：

关键词： NEDDylation;NEDD8;单克隆抗体

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 83-88

收录情况： 北大核心

摘要： 利用RT-PCR从A549细胞中扩增出类泛素化蛋白编码的nedd8基因,将其克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,测序验证后转化入BL21(DE3)进行IPTG诱导,表达获得NEDD8蛋白,经纯化后,免疫接种6周龄BALB/c小鼠。细胞融合后,用ELISA和Western blot方法筛选单克隆抗体细胞株。结果成功制备获得3株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,所得到的3株单抗适用于Co-IP试验,可以特异性检测NEDD8修饰的Cullin-1底物。通过分段表达鉴定单抗针对的抗原表位可能在29RVEE32氨基酸区域,与泛素化蛋白(Ub)无交叉反应。本研究制备的特异性单抗为进一步鉴定NEDDylation修饰底物提供了良好的抗体工具。

分类号： S852.4

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