罗非鱼无乳链球菌LrrG蛋白的原核表达及免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈雪

作者： 陈雪;可小丽;卢迈新;刘志刚;高风英;朱华平;曹建萌

作者机构：

关键词： 罗非鱼;无乳链球菌;LrrG蛋白;原核表达;蛋白纯化;免疫原性

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2014 年 38 卷 05 期

页码： 92-100

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： LrrG蛋白是无乳链球菌较保守的表面蛋白之一。为获得罗非鱼源无乳链球菌LrrG蛋白并探讨其在罗非鱼体内的免疫原性,本实验根据GenBank中已报道的人源无乳链球菌LrrG基因序列,设计特异性引物,扩增获得罗非鱼源无乳链球菌的LrrG基因。分析表明,其ORF为2 361 bp,编码786个氨基酸,与人源无乳链球菌LrrG基因核苷酸序列的相似性高达98.48%。LrrG蛋白含有3个保守的LRR结构域,并可形成多个抗原表位。将LrrG基因片段克隆转入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)/LrrG,E.coli BL21(DE3)22℃诱导表达6 h。SDS-PAGE显示,诱导表达蛋白的分子量为108.9 ku,并且该重组蛋白以可溶和包涵体2种形式存在。经His Bind亲和柱纯化及超滤管浓缩后,LrrG可溶蛋白浓度达3.40 mg/mL。鱼体注射免疫实验表明,LrrG可溶蛋白对罗非鱼的相对免疫保护率达69.28%,且免疫后4周的血清抗体滴度为1∶800。该研究为深入探讨无乳链球菌LrrG蛋白作为罗非鱼基因工程疫苗的潜在应用价值奠定了基础。

分类号： S941

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