草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘光全

作者： 刘光全;刘柱;陆伟;徐玉泉;梁爱敏;平淑珍;张维;陈明;林敏

作者机构：

关键词： EPSP合酶新基因;错误倾向PCR;草苷膦抗性;蛋白高级结构预测;扭转角;蛋白中心骨架比较预测

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2006 年 22 卷 03 期

页码： 197-203

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用错误倾向PCR(error-prone PCR)突变技术,以可变盐单胞菌(Halomonas variabilis)HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段(约1·35kb).将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合酶缺陷型菌株大肠杆菌ER2799.利用功能互补筛选法得到了2株不具有草苷膦抗性的EPSP合酶阳性克隆突变株,记为Pmu1和Pmu2.序列分析表明,突变体Pum1的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有2处发生突变,导致氨基酸残基1处发生了改变;突变体Pmu2的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有5处发生突变,导致氨基酸残基2处发生了改变.对突变前后EPSP合酶进行比较预测发现,其三级结构及蛋白中心骨架是大致相同的,但突变前后氨基酸位点肽平面和Cα相连的N键之间形成的扭转角度存在一定的差别.这些结果表明,酶的功能主要由蛋白的构象决定,二肽链形成后肽平面和N键之间角度的变化,造成高级结构构象细微的差别,致使草苷膦抗性功能丢失.

分类号： Q78`Q51

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