口蹄疫病毒OH株结构蛋白基因VP1的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 龚真莉

作者： 龚真莉;刘湘涛;尚佑军;田宏;吴锦艳;尹双辉;陈国栋

作者机构： 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

关键词： 口蹄疫病毒;VP1基因;基因克隆;表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2006 年 36 卷 07 期

页码： 515-518

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18-T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区。根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VPl基因片段的末端序列设计了1对表达引物,以重组pMD-T-VP1阳性质粒为模板,扩增获得了VP1基因,通过酶切将其克隆至表达载体pQE-Trisystem上。经测序证实,重组表达质粒所含的外源基因VP1编码框正确无误。将重组表达质粒pQE-VP1转化至大肠埃希氏菌M15,通过IPTG诱导促使VP1基因高效表达,SDS- PAGE和Western-blot分析表明,表达产物大小与预期的结果(26 ku)一致,且具有良好的反应原性。以2 mmol／L IPTG诱导表达5 h时表达量最高,其中70％-80％的目的蛋白存在于菌体裂解后的上清中,表明外源基因VP1主要以可溶性方式表达。

分类号： S852.65

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