表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郝嘉翼

作者： 郝嘉翼;李乐天;张和平;陈永福;金宁一;王茂鹏;李昌

作者机构：

关键词： PDCoV;S1蛋白;植物乳杆菌;构建与表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2021 年 012 期

页码： 2304-2310,2369

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究拟构建猪δ冠状病毒（PDCoV）S1蛋白的重组植物乳杆菌。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质粒并验证,获得重组质粒NZ3900:pSIP411-PDCoV S1。将重组质粒电转入植物乳杆菌LP18,获得重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1,对诱导时间、诱导剂质量浓度、诱导温度等表达条件进行优化,以获得最佳表达条件。结果显示,成功扩增出1 939 bp经过修饰和优化的目的基因PDCoV S1,成功构建了重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1。Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法表明重组蛋白能够在重组植物乳杆菌中表达,最佳表达条件:诱导时间为6 h、诱导剂质量浓度为150μg/L、诱导温度为33℃。本试验成功构建了1株高表达PDCoV S1蛋白的植物乳杆菌,为PDCoV口服候选疫苗的研制奠定基础。

分类号： S852.651

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