猪带绦虫缺氧诱导因子-1的原核表达和真核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周玲玲

作者： 周玲玲;骆学农;张少华;侯俊玲;孙铭苑

作者机构：

关键词： 猪带绦虫;缺氧诱导因子-1;原核表达;真核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2015 年 07 期

页码： 668-673

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了表达猪带绦虫的缺氧诱导因子-1(HIF-1)并制备其特异性抗体,根据本课题组对猪带绦虫全基因组测序获得的HIF-1基因序列设计了1对特异性引物,以提取的猪带绦虫的总RNA为模板,通过RTPCR获得猪带绦虫HIF-1基因。将该基因定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果显示,获得了约为17.0ku的表达产物,与目的蛋白的大小相符。原核表达的蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,ELISA和Western-blot结果表明,制备的多克隆抗体有较高的抗体效价(1∶51 200)和抗原特异性。该基因又被定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1中进行了真核表达。结果成功构建了猪带绦虫HIF-1因子的原核表达系统和真核表达系统,并制备出其多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定了基础。

分类号： S852.734

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