牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨生海

作者： 杨生海;殷宏;刘永生;马艳平;丁耀忠;孙彩琴;丁小丽;张杰

作者机构：

关键词： 牛叠朊;缺失突变体;免疫印迹;酶联免疫吸附分析

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2011 年 31 卷 10 期

页码： 1442-1448

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a(+)表达载体连接后转入E.coli DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入E.coliJM109和E.coli BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功构建了9个牛叠朊编码基因的缺失突变体,通过IPTG的诱导表达,其中有6个缺失突变体被大肠杆菌高效表达,并且具有较好的反应原性,这为其单克隆抗体表位的进一步鉴定奠定了物质基础。

分类号： S852.65

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