非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 范亚亚

作者： 范亚亚;王轩莹;户鑫兵;田占成;关贵全;罗建勋;殷宏;郑玉姝;独军政

作者机构：

关键词： 非洲马瘟病毒;VP5蛋白;杆状病毒表达系统;多克隆抗体;免疫荧光

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 54 卷 003 期

页码： 357-363

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒.SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白.采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性.本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了 AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础.

分类号： S852.659.4

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