旋毛虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及组织定位

文献类型： 中文期刊

第一作者： 牛栋玉

作者： 牛栋玉;张念章;李文卉;刘垠鞠;秦洪涛;张永芝;殷宏;付宝权

作者机构：

关键词： 旋毛虫;乳酸脱氢酶;反应原性;免疫组化定位

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 004 期

页码： 463-469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究旋毛虫乳酸脱氢酶（TsLDH）的反应原性及组织分布特点，从GenBank中获取TsLDH基因序列进行生物信息学分析，设计引物对其进行RT-PCR扩增，将PCR产物连接到pET-30a质粒构建重组表达质粒p ET30a-TsLDH，转化大肠杆菌BL21(DE3）中进行表达。将重组蛋白rTsLDH纯化后，通过Western-blot进行反应原性分析，与弗氏佐剂混合免疫家兔，采血分离血清，用间接ELISA方法检测家兔抗rTsLDH多克隆抗体效价。并利用纯化后的家兔抗rTsLDH抗体对TsLDH进行组织定位。经优化后在37℃，200 r/min,1 mmol/L IPTG诱导条件下成功表达重组蛋白rTsLDH，其分子质量约为39.4 k Da，且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明重组蛋白rTsLDH可以被旋毛虫感染猪血清识别，具有反应原性。多克隆抗体效价为1∶5.12×10～5。组织定位结果显示，TsLDH存在于旋毛虫3个发育时期的体表及杆状体中，且在成虫时期可分泌到宿主肠组织周围，但不能分泌到感染的肌肉组织中。结果表明rTsLDH具有良好的反应原性，且TsLDH存在于虫体的各个时期，为旋毛虫病诊断候选抗原及药物靶标筛选提供了依据。

分类号： S852.731

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