蓝舌病毒血清1型VP5蛋白的截短表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘学春

作者： 刘学春;户鑫兵;宋昱庆;孟凡华;田占成;关贵全;殷宏;独军政

作者机构：

关键词： 蓝舌病毒;VP5蛋白;截短表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 010 期

页码： 1350-1356

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 参考GenBank中蓝舌病毒血清1型(BTV-1)标准参考株VP5蛋白氨基酸序列,缺失N端1~79位氨基酸,按照大肠杆菌偏好性进行基因密码子优化后,合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa,将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上,构建了重组质粒pET-sumo-VP5Δ79aa.将该重组质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中,用0.5 mmol/L IPTG分别在37 ℃和16 ℃条件下进行诱导表达和可溶性分析,经SDS-PAGE检测,重组VP5Δ79aa蛋白主要以包涵体形式表达.用Ni-NTA亲和层析法纯化重组VP5Δ79aa蛋白,得到与预期大小相符的单一目的条带.纯化后的重组VP5Δ79aa蛋白经不同浓度梯度的尿素透析复性后,将其免疫雌性BALB/c小鼠(6~8周龄),取免疫后脾细胞与骨髓瘤细胞融合,获得能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经间接ELISA、免疫荧光和Western-blot分析,筛选得到2株反应性和特异性良好的单克隆抗体4A10和5H11,其不仅能与重组VP5Δ79aa截短蛋白以及重组全长VP5蛋白反应,而且能特异识别BTV-1感染细胞中的天然VP5蛋白,这为深入研究BTV VP5蛋白的生物学功能及其抗原表位鉴定奠定了基础.

分类号： S852.659.4

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