4种牛分枝杆菌特异性基因PCR检测方法的比较与评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 辛凌翔

作者： 辛凌翔;王豪杰;刘燕;姚文生;胡云皓;张一帜;赵浩然;鑫婷;朱良全

作者机构：

关键词： 牛分枝杆菌;病原;PCR;灵敏度;特异性

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2023 年 55 卷 012 期

页码： 55-61

收录情况： 北大核心

摘要： 牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一.本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考.针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16SrRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物,通过温度梯度PCR法确定最适退火温度;采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限,同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验;最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果.4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌,其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌.IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高,可达10-10 ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达106 CFU/mL以上,而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达102 CFU/mL.本研究筛选出相对适宜的牛分枝杆菌PCR检测方法,为牛结核病病原学检测和临床应用提供技术支持.

分类号： S854.4

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