基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈阳

作者： 陈阳;刘彤;张佳琦;廖化新;林跃智;王晓钧;王亚玉

作者机构：

关键词： 马IgG;单个B细胞PCR;抗体筛选技术;单克隆抗体

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2022 年 42 卷 004 期

页码： 17-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关.为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选.首先,将马IgG蛋白(EqIgG1-C)密码子优化后合成到真核表达载体pcDNA3.4上,纯化出抗原蛋白.随后,使用蛋白质免疫小鼠,分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B细胞,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,用overlapping PCR方法扩增出线性化的完整抗体,并进行鉴定.结果从80个B细胞中获得了 27株特异性重组单克隆抗体,并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上,共转染Expi293FTM细胞后表达纯化,经过ELISA和Western blot验证,显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用.使用该方法可以省时高效的获得特异性抗体,为马的免疫学研究提供了重要研究工具,为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展.

分类号： Q816

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