绿盲蝽超气门蛋白ALUSP的克隆、原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谭永安

作者： 谭永安;肖留斌;孙洋;赵静;柏立新

作者机构：

关键词： 绿盲蝽;超气门蛋白;基因克隆;原核表达

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2014 年 47 卷 11 期

页码： 2162-2172

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因(ALUSP),获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过设计特异性引物,利用RACE方法,分别克隆ALUSP 5′及3′段序列,然后通过拼接获得ALUSP全长序列;应用生物信息学方法,对ALUSP基因序列特征及其所编码蛋白的特性进行分析,建立系统进化树;将含有ALUSP的T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建ALUSP原核表达载体pEGX6P1-ALUSP,将该表达载体分别在15、25、30和37℃条件下进行诱导表达,再通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析后获得ALUSP功能区纯化蛋白。【结果】ALUSP开放阅读框长1 005 bp,编码334个氨基酸,预测分子量56.63 kD,理论等电点8.42;序列特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有超气门蛋白的典型特征,由A/B域(249 bp)、C域(198 bp)、D域(69 bp)和E域(489 bp)组成,其中C域高度保守,包含2个锌脂结构并含有1个P-盒和1个D-盒,且含有由8个氨基酸构成的核定位信号,D域含有1个识别DNA元件的T-盒,E域含有1个由8个α螺旋和1个β折叠形成袋状结构;氨基酸比对结果表明,ALUSP的氨基酸序列与稻绿蝽USP序列一致性最高(57.82%),与其他昆虫的USP序列一致性较低,如膜翅目的 Melipona scutellaris(46.05%)、Scaptotrigona depilis(45.94%);系统进化树分析结果显示,半翅目与膜翅目、直翅目等昆虫的USP较为分化,位于不同分支,ALUSP与稻绿蝽USP进化关系最近,可能来源于共同的祖先。EcoR I和Xho I双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pEGX-6P-1载体上,命名为pEGX6P1-ALUSP;经37℃、1.0 mmol·L-1的IPTG诱导的pEGX6P1-ALUSP重组质粒可特异性表达1个约65 kD的蛋白,并且该重组ALUSP蛋白主要以包涵体形式存在;收集含有目的基因的菌株进行GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析,最后进行复性和纯化后在65 kD附近仅出现1条清晰的特异性条带,表明已得到纯化的靶蛋白。【结论】克隆了ALUSP全长,其具有昆虫超气门蛋白的典型特征,并获得了原核表达的重组蛋白。

分类号： S433.3

  • 相关文献

[1]绿盲蝽核受体基因AlE75D的克隆和性质分析. 谭永安,赵旭东,肖留斌,孙洋,赵静,柏立新,郝德君. 2017

[2]绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP7的表达及气味结合特性. 刘靖涛,谷少华,朱晓强,张永军,郭予元. 2013

[3]绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1的克隆、表达谱分析及结合特征. 滑金锋,张帅,崔金杰,王道杰,王春义,雒珺瑜,吕丽敏. 2012

[4]绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性. 谭永安,肖留斌,柏立新,孙洋. 2013

[5]绿盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1基因原核表达、纯化与酶学特性. 谭永安,肖留斌,孙洋,柏立新. 2013

[6]绿盲蝽磷脂酶C(AlPLC)的表达、纯化及酶学性质. 谭永安,赵旭东,郝德君,肖留斌,柏立新,赵静,孙洋,姜义平. 2017

[7]绿盲蝽表皮蛋白基因AlCP17的克隆、多克隆抗体制备及表达谱分析. 谭永安,张杰钰,姜义平,赵静,肖留斌,戈林泉. 2023

[8]绿盲蝽卵黄原蛋白(Vg)基因片段克隆及不同生境表达量分析. 张未仲,胡增丽,刘朝红,韩凤,赵龙龙. 2020

[9]绿盲蝽酯酶基因AlucEST1的克隆及表达谱分析. 谷少华,武红珍,韩榕,张永军,郭予元. 2012

[10]金银花糖基转移酶基因LjUGT71E1的克隆及原核表达. 徐道华,亓希武,陈吟,于盱,房海灵,梁呈元. 2018

[11]小麦胚乳14-3-3基因的克隆及其重组蛋白的原核表达. 戴双,李豪圣,程敦公,刘爱峰,曹新有,刘建军,宋健民. 2012

[12]猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化. 王小敏,何孔旺,张文文,王东田,周忠涛,张雪寒,周俊明,汪伟,倪艳秀,温立斌. 2013

[13]烟夜蛾几丁质酶基因的克隆与表达. 涂洪涛,付晓伟,郭线茹,李为争,罗梅浩,原国辉. 2009

[14]水稻白叶枯病菌TCS应答调节子GacAxoo的分子克隆及其原核表达. 吴茂森,何晨阳. 2008

[15]玉米磷酸丙糖异构酶基因的克隆及原核表达. 马芳芳,苏彦冰,张彬,李红英,韩渊怀. 2016

[16]捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达. 赵军明,荣光,郑金海,王新华,薄新文,刘志强,黄新,罗盘棋,任耀军. 2009

[17]枯草芽孢杆菌CAS15嗜铁素基因dhbC的克隆、表达及功能鉴定. 余贤美,林超,郑服丛,贺春萍,张修国. 2009

[18]芝麻抗裂蒴基因SiIND1的克隆与原核表达. 刘艳阳,武轲,梅鸿献,杜振伟,崔承齐,江晓林,郑永战. 2020

[19]桑树几丁质酶基因Machi1的克隆及原核表达. 肖圣燕,朱峰,冉瑞法,李镇刚,张永红,邵榆岚,唐芬芬,白兴荣. 2019

[20]野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因克隆和生物信息学分析. 郭坤元,林先明,何美军,郭汉玖. 2018

作者其他论文 更多>>

微信小程序