非洲猪瘟病毒pA104R蛋白单克隆抗体的制备与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王露露

作者： 王露露;皇甫皓月;席飞;张振江;Weldu Tesfagaber;张纪文;黄炼榆;李芳;步志高;赵东明

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;pA104R;蛋白印迹法;间接免疫荧光;单克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 1214-1218

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒（ASFV）Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白（rpA104R）,以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体（MAb）,并采用ELISA、western blot、间接免疫荧光法（IFA）和免疫组化（IHC）对所获得的MAb进行鉴定。结果显示,正确构建p ET-30a-A104R重组质粒,并获得大小约为12 ku的可溶性蛋白。通过间接ELISA方法筛选到2株阳性杂交瘤细胞株为4G2和4E10,并且2株MAb的重链均为IgG1,轻链为Kappa链。Western blot和IFA结果显示,MAb 4G2株能够特异性地识别ASFV pA104R蛋白和病毒感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pA104R蛋白。IHC结果表明,MAb 4G2可以与病毒感染的阳性猪组织发生特异性反应。本研究也为ASFV基因缺失疫苗的开发提供了技术储备。

分类号： S852.651

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