牛呼吸道疾病综合征中4种病毒性病原多重TaqMan qPCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐雪可

作者： 徐雪可;张乾义;赵文娟;何高明;吴桐忠;王莉莉;黎雪勤;姜美奇;韩猛立;张星星;张倩;钟发钢;黄新

作者机构：

关键词： 牛副流感病毒3型;牛呼吸道合胞体病毒;牛传染性鼻气管炎病毒;牛病毒性腹泻-黏膜病;TaqMan qPCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 007 期

页码： 697-705

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种能同时检测牛副流感病毒3型（BPIV3）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）这4种病原的方法，本研究分别以BPIV3和BRSV的P基因、IBRV的gI基因和BVDV的5'UTR基因为靶基因设计特异性引物和探针，构建质粒标准品pUC57-BPIV3-P、pUC57-BRSV-P、pUC57-IBRV-gI和PVC57-BVDV-5'UTR，并经PCR和测序鉴定正确后等体积比混合作为模板，采用方阵法对引物、探针和各反应条件等的优化，初步建立引起牛呼吸道疾病综合征（BRDC）4种病毒性病原的多重TaqMan qPCR检测方法。结果显示，建立的多重qPCR仅能特异性检测BPIV3、BRSV、IBRV和BVDV，与引起BRDC其他病原的牛冠状病毒（BCoV）、牛支原体（M-bov）、牛多杀性巴氏杆菌（Pm）、牛溶血性曼氏杆菌（Mh）均无交叉反应；对1:1:1:1混合的4种质粒标准品的检测限均为10拷贝/μL；组内和组间重复性试验的变异系数均小于1%；以本研究方法和国家标准检测法对149份临床样品平行检测BVDV，结果显示两种方法的总符合率分别为80.85%，以本研究方法和已有专利中的多重qPCR方法对149份临床样品平行检测BPIV3、BRSV、IBRV，结果显示两种方法的总符合率分别为75.07%、100%和92.83%，临床样品中存在4种病原8种混合感染情况。结果表明，本研究建立的致BRDC的4种病毒多重Taq Man qPCR方法特异性强、敏感性高、重复性和准确性均较好，可用于BPIV3、BRSV、IBRV和BVDV这4种常见牛病毒的鉴别检测和流行病学调查，为养殖场BRDC的防控奠定基础。

分类号： S858.23

  • 相关文献

[1]河南牛病毒性腹泻-黏膜病流行病学调查. 菅复春,王建领,王炜,刘海花,付彤,邓立新,郝丽影,寇亚楠,张龙现,宁长申. 2012

[2]毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立. 靳浩展,肖文婉,廖申权,戚南山,李娟,吕敏娜,蔡海明,胡俊菁,林栩慧,宋勇乐,陈祥杰,朱易斌,尹理君,张健騑,张旭,孙铭飞. 2024

[3]牛病毒性腹泻-黏膜病的研究进展. 张国华,吕思文,金振华,王丽坤,张备,薛沾枚,张艳,黄新育. 2022

[4]PDCoV N基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立. 马翮斯,罗灵芝,王元红,虞凌雪,李国新. 2025

[5]牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备. 马磊,朱远茂,蔡红,王姝,史鸿飞,吕闯,董秀梅,高欲燃,薛飞. 2012

[6]表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定. 冯军科,朱远茂,任宪刚,祖立闯,李娇,史鸿飞,高欲燃,童光志,薛飞. 2010

[7]套式RT-PCR检测牛呼吸道合胞体病毒的研究. 史鸿飞,朱远茂,高欲燃,任宪刚,冯军科,于作,薛飞. 2010

[8]牛呼吸道合胞体病毒G蛋白的截短表达与鉴定. 冯军科,薛飞,李娇,祖立闯,朱远茂,任宪刚. 2008

[9]主要病毒性牛呼吸道疾病的研究进展. 韩猛立,黄新,钟发刚. 2013

[10]牛呼吸道合胞体病毒检测方法研究进展. 杨洺扬,王炜,李真光,董鹏,胡桂学,武华,陈立志,程世鹏,冷雪. 2014

[11]牛病毒性腹泻疫苗. 胡小华. 2005

[12]基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用. 王磊,常继涛,于力. 2019

[13]牛呼吸道合胞体病毒RT-LAMP检测方法的建立. 李家伟,王建科,张淑琴,张加力,郭利. 2019

[14]北方三省(区)牛副流感病毒3型的血清学调查. 霍志云,童钦,胡嘉欣,王炜. 2012

[15]一起牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型和大肠杆菌混合感染的诊疗报告. 傅欣玲,张聪,舒鑫,李文良. 2018

[16]1株B基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定及全基因组序列分析. 张倩,王旭,韩猛立,张星星,吴桐忠,钟发钢,黄新,张乾义. 2024

[17]牛副流感病毒3型核衣壳蛋白基因的真核表达. 师新川,温永俊,王凤雪,王炜,王建科,程世鹏,武华. 2012

[18]牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化. 曹丽,高维凡,温永俊. 2014

[19]牛副流感病毒3型NP单抗的制备及初步应用. 吕闯,朱远茂,董秀梅,蔡红,于作,高欲燃,薛飞. 2011

[20]牛副流感病毒3型抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用. 杨建乐,赵贵民,侯佩莉,王洪梅,李杰,何洪彬. 2016

作者其他论文 更多>>

微信小程序