GPX4失活通过JNK通路缓解LPS诱导巨噬细胞炎症反应

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱家威

作者： 朱家威;赵潇晗;马翠;汤超华;司玮;赵青余;张军民;秦玉昌

作者机构：

关键词： 谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）;RAW264.7;JNK信号通路;炎症反应

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN：

年卷期： 2022 年 011 期

页码： 4178-4186

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】研究硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidases 4,GPX4）失活如何参与调控脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及其潜在的分子机制。【方法】体外培养RAW264.7巨噬细胞，以DMSO为对照，使用0.1～5.0μmol/L GPX4抑制剂FIN56处理，通过CCK-8法检测细胞活力和Western blotting检测GPX4蛋白表达水平，确定抑制剂最适浓度。将RAW264.7巨噬细胞分为4组：对照组，添加DMSO培养24 h; FIN56（GPX4抑制剂）组，添加0.5μmol/L FIN56培养24 h; DMSO-LPS组，DMSO培养24 h后使用LPS（100 ng/mL）刺激3 h; FIN56-LPS组，FIN56培养24 h后使用LPS刺激3 h。各组细胞经培养后，利用荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2′,7′-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate, H2DCFDA）检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，使用试剂盒法检测细胞内丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平，分别使用ELISA和荧光定量PCR检测促炎细胞因子白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌水平和基因表达量，使用Western blotting法检测Toll样受体4（toll like receptor 4,TLR4）信号通路相关蛋白表达水平。【结果】与DMSO处理相比，0.5μmol/L FIN56处理巨噬细胞24 h对细胞活性无显著影响（P＞0.05）,且显著降低GPX4蛋白表达水平（P＜0.05）,故选用0.5μmol/L FIN56用于后续实验。与对照组相比，FIN56和LPS均显著增加了ROS积累（P＜0.05）,而与DMSO-LPS组相比，FIN56-LPS组ROS水平显著升高（P＜0.05）。与对照组相比，LPS可显著增加小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达量和IL-6含量，以及c-Jun氨基末端蛋白激酶（c-Jun N-terminal protein kinase, JNK）和c-Jun磷酸化水平（P＜0.05）,而FIN56可显著下调LPS诱导的IL-6的mRNA表达量和含量及JNK和c-Jun磷酸化水平（P＜0.05）,但对p38蛋白（p38 MAPK,p38）、细胞外调节蛋白激酶（phosphorylate extracellular regulated protein kinases1/2,Erk1/2）蛋白表达水平无显著影响（P＞0.05）。【结论】GPX4失活可有效阻断JNK和c-Jun磷酸化，从而特异性抑制LPS诱导的巨噬细胞的炎症反应。该结果可为以GPX4为靶点研发抗炎治疗策略提供理论依据。

分类号： S852.3

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