检测miRNA活性的双荧光素酶单载体

文献类型： 中文期刊

第一作者： 毕延震

作者： 毕延震;郑新民;邵长伟;潘雯;姜黎;欧阳辉武;乔宪凤;刘西梅

作者机构：

关键词： 微小RNA;荧光素酶;非连接酶依赖;mRNA靶分子;单载体

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2012 年 08 期

页码： 775-780

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体的海肾荧光素酶基因(Renillaluc)和氨苄青霉素抗性基因之间,构建为两种荧光素酶基因表达框并置的单载体报告系统,命名为pMiSensor.在海肾荧光素酶基因的3'非翻译区引入多克隆位点Xba I和Apa I,便于克隆目的基因的3'UTR.海肾荧光素酶为报告基因,萤火虫荧光素酶为内参基因.多种哺乳动物细胞系的转染实验证实,pMiSensor可同时有效表达两种报告基因,其酶活显示出宽广的线性范围.通过构建pMiSensor-CCNE1报告载体,证明pMiSensor能够重现miR16对细胞周期蛋白CCNE1的调控作用.通过转染miR16抑制剂,证明pMiSensor-CCNE1可作为一种灵敏的生物感应器,探测细胞内微小RNA的活性变化.该双荧光素酶单载体具有重复性高、操作简便、定量准确的优点,适用于微小RNA靶分子的筛选、鉴定和确认,也适用于在细胞水平定量分析微小RNA的活性变化.

分类号： Q78

  • 相关文献

[1]一种高效的单质粒模式四环素诱导表达系统的构建. 马卓,乔宪凤,郑新民,周荆荣,刘西梅. 2012

[2]两种根癌土壤杆菌介导的荧光素酶在植物体内表达分析. 薛杨,赵文军,孙现超,青玲,杨水英. 2010

[3]家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定. 陈萌萌,范志宇,胡波,宋艳华,魏后军,仇汝龙,朱伟峰,徐为中,王芳. 2019

[4]基于荧光素酶活体成像筛选转基因玉米植株的条件优化. 常利芳,白建荣,李锐,闫蕾,郝曜山,杨瑞娟,康晨. 2020

[5]基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立. 胡积祥,曹雅倩,朱秀梅,余超,田芳,杨凤环,陈华民,何晨阳. 2019

[6]角蛋白启动子荧光素酶表达载体的构建及其表达活性分析. 代蓉,孟庆勇,沈思军,石国庆,刘守仁. 2011

[7]介导PRRSVORF1a/1b间程序性-1核糖体移码的刺激元件为假节结构. 韦祖樟,高飞,姜一峰,周艳君,袁世山,童光志. 2013

[8]表达荧光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因重组非洲猪瘟病毒的构建. 康力,周仕君,宋洁,李江南,翁长江. 2021

[9]用于山羊痘病毒载体的强痘病毒启动子筛选. 谢梅梅,李翠翠,张家林,王子龙,陈伟业,步志高. 2015

[10]表达荧光素酶重组RABV rERA-Luc株的构建及其生物学特性的研究. 王娅荣,帅磊,王金明,舒伦,金山,步志高. 2021

[11]细胞microRNA130家族抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒的复制. 李丽薇,高飞,姜一峰,虞凌雪,童光志. 2015

[12]表达马传染性贫血病毒受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立. 王登峰,张淑琴,马学恩,简子建,周建华. 2007

[13]苹果U6启动子的克隆及功能分析. 卞书迅,韩晓蕾,袁高鹏,张利义,田义,张彩霞,丛佩华. 2019

[14]用于检测芳香烃类化合物的重组细胞构建. 逄秀梅,刘悦,崔婧,贾曼,陈刚. 2017

[15]荧光素酶报告基因在转基因蚕中的应用. 陈秀,张峰,赵昀,祁国荣,陆长德,黄君霆. 2000

[16]伪狂犬病毒的microRNAs靶基因预测及功能鉴定. 刘飞,童武,郑浩,李国新,梁超,郑旭晨,田青,童光志. 2016

[17]雌雄鸡胚性腺microRNA表达检测及靶基因预测分析. 何川,赵乐乐,翟正晓,高宏巍,蒲弘俊,陈永灿,汤琳琳,杨凯旋,李世玉,黄启忠,孟和. 2012

[18]亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆外泌体微小RNA差异表达谱分析. 陈倩,冯增强,谭琳,饶彩霞,张炯炯,赵静,唐秋萍. 2024

[19]家蚕miR-0047对丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用研究. 钱平,蒋涛,何平,陈晨,唐旭东,唐顺明,沈兴家. 2017

[20]miR-M11基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响. 王伟东,滕蔓,郑鹿平,刘金玲,张文凯,李林燕,张志会,樊剑鸣,罗俊. 2023

作者其他论文 更多>>

微信小程序