少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶P186基因的克隆、序列分析及表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵海龙

作者： 赵海龙;孟庆玲;乔军;陈双庆;王国超;谢堃;胡政香

作者机构：

关键词： 少孢节丛孢菌;丝氨酸蛋白酶P186;克隆;表达

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2014 年 29 卷 04 期

页码： 93-97

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因序列设计特异性引物,运用RT-PCR扩增获得目的基因片段,构建重组表达质粒pET32a-P186,转化到大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。结果表明,P186基因cDNA全长为1 224 bp,编码407个氨基酸,其中第1~21位为信号肽序列,氨基酸序列的第156~167位、192~202位、343~353位分别是天冬氨酸(Asp160)、组氨酸(His192)、丝氨酸(Ser345)活性位点所在区域,属于Subtilase家族,包括2个潜在的N-联糖基化位点(Asn249、Asn342)及与底物结合的S1区(SBP)Ser251Ile252Gly253和Ala277Ala278Gly279。SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为62 kDa。Western Blot分析结果表明,P186重组蛋白可以与抗蛋白粗提液多克隆抗体发生反应。为了揭示少孢节丛孢菌捕食线虫的分子机制,首次克隆并表达了少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因,为进一步研究丝氨酸蛋白酶P186的生物学功能奠定了基础。

分类号： Q78

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