用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘长龙

作者： 刘长龙;李燕华;袁世山

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;全长感染性cDNA克隆;HDV核酶;DNA转染

期刊名称： AgriculturalScience&Technology

ISSN：

年卷期： 2010 年 06 期

页码： 32-36

收录情况： CSCD

摘要： [目的]利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率。[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly(A)下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2(nsp2)的表达,并用检测细胞上清中病毒的滴度。[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB。新构...

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