猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁望旺

作者： 梁望旺;伍锐;杨克礼;刘泽文;熊忠良;段正赢;邓均华;唐文娟;余爱冬;徐涤平

作者机构： 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所;湖北工业大学生物工程学院

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);囊膜糖蛋白(GP5);克隆;原核表达

期刊名称： 湖北农业科学

ISSN： 0439-8114

年卷期： 2009 年 05 期

页码： 1048-1050+1141

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR方法扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒临床分离株(HBKM2)的ORF5全基因,并进行了测序分析,根据ORF5的结构特点,进一步扩增了截去N端信号肽序列的ORF5(nsORF5),并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体,构建了重组质粒pKG-ns5,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的nsORF5基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-nsGP5分子量约为43kD,并具有反应活性,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的功能及新型疫苗、血清学诊断方法的研制奠定了基础。

分类号： S852.659.4

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