用于CRISPR文库筛选的N2a-Cas9细胞系的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张纪文

作者： 张纪文;王露露;李芳;刘杏;赵东明;步志高

作者机构：

关键词： 基因编辑;慢病毒;高通量筛选;鼠神经瘤母细胞

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 42 卷 012 期

页码： 1292-1295

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了进行CRISPR文库筛选,本研究采用慢病毒转导的方法利用N2a细胞构建表达Cas9蛋白的N2a-Cas9单克隆细胞系.实验将LentiCas9-Blast、pSPA X2和pMD 2.G 3种质粒共转染人胚胎肾细胞(HEK293T)获取高滴度的重组慢病毒,收集重组慢病毒并感染N2a细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,通过有限稀释法获得含有Cas9基因的多个单克隆细胞株.Western blot结果显示候选细胞系高水平表达Cas9蛋白;利用慢病毒表达报告基因载体系统检测显示候选细胞系的Cas9蛋白具有很高的切割活力;利用CellTiter-Glo试剂检测结果显示,Cas9基因在候选细胞系内高表达但不影响细胞增殖活性.本研究利用慢病毒转导系统构建了稳定表达Cas9蛋白的N2a-Cas9单克隆细胞系,为基于CRISPR/Cas9全基因组高通量筛选技术探究神经细胞内关键宿主基因调控狂犬病病毒嗜神经性提供研究基础.

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]高通量筛选蛋白质突变体库方法的研究进展. 黄国庆,姚泉洪. 2004

[2]除草剂室内高通量筛选方法研究. 张志刚,杨自文,王开梅,张亚妮,张遵霞. 2011

[3]畜禽动物中长链非编码RNA的研究现状. 戴梦红,陆启荣,程古月,李丽,刘孟轲,郝海红,王旭,袁宗辉. 2016

[4]抑制番茄早疫病菌活性化合物的高通量筛选方法研究. 张晓,王满意,于淑晶,王力钟,李宝聚,赵卫光. 2010

[5]从放线菌发酵液中高通量筛选端粒酶抑制剂. 张慧敏,曹莹,王卫国,李波兰,沈会芳,林壁润,庞建新,吴曙光. 2010

[6]核糖体工程技术选育卡伍尔链霉菌高产菌株. 李文华,黄永春,杨少彬,陈璐. 2017

[7]耐UV辐射微生物高通量筛选模型的建立及初步验证. 张志东,朱静,顾美英,王玮,石劲松,谢玉清,唐琦勇,宋素琴. 2013

[8]CRISPR技术的研究进展和应用. 赵正伟,马青,马丽娜,王锦,王晓薇,李颖康. 2021

[9]基于CRISPR/Cas9技术的高通量筛选平台:发掘病毒复制相关宿主分子的新途径. 王文静,李素,肖书奇,仇华吉. 2018

[10]大豆的孢囊线虫抗性研究新进展. 彭德良. 2016

[11]获取有机物厌氧降解产甲烷过程中关键功能类群——互营细菌培养物. 张雪,张辉,承磊. 2019

[12]VIGS技术高通量筛选棉花抗黄萎病相关基因. 郭安慧,翟伟卜,郭慧敏,张珊珊,张文蔚,简桂良,韩榕,齐放军. 2016

[13]蛋白质定向进化技术的研究进展. 苏怡丹,伍宁丰,刘国安. 2009

[14]饲料用酶制剂的研究进展与趋势. 杨培龙,姚斌. 2009

[15]高通量筛选差异表达基因技术简介. 狄冉,储明星. 2010

[16]高产截短侧耳素产生菌高通量筛选方法的建立. 王学红,梁剑平,赵晓彬,刘宇,郝宝成. 2013

[17]噬菌体展示技术在食品安全分析中的应用. 赵岩岩,赵圣明,梁颖,刘贤金,张浩,李红波,屠康. 2017

[18]乳糖酶突变体库的构建及高活性突变体的快速筛选. 秦星,孙宁,张丰华,张宇宏,吴坤,张伟,刘波. 2014

[19]植酸酶发展现状和研究趋势. 丁强,杨培龙,黄火清,王亚茹,姚斌. 2010

[20]亚洲玉米螟几丁质酶的双靶向天然产物抑制剂及其抑制机理. 何丹婵,姜熙,杨青. 2022

作者其他论文 更多>>

微信小程序