悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王海春

作者： 王海春;贾红;袁维峰;侯绍华;郭晓宇;鑫婷;朱鸿飞

作者机构：

关键词： 牛γ-干扰素;杆状病毒;悬浮培养;质谱分析;抗病毒活性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2012 年 39 卷 11 期

页码： 7-12

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定。利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段。将其克隆到pFast-BacTMHTA中构建重组质粒pFastBacTMHTA-BovIFN-γ。然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ。转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBov-IFN-γ。利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定。Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性;MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ;MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×105 IU/mg。

分类号： S823`S852.4

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