逆转录病毒载体介导的稳定表达口蹄疫病毒3D基因的BHK21细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 毕研丽

作者： 毕研丽;沈小燕;丛国正;刘湘涛;常惠芸;才学鹏

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;3D基因;逆转录病毒载体pBPSTR1;BHK-21细胞系

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2008 年 48 卷 8 期

页码： 1115-1120

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1-3D。用pBPSTR1-3D和pVSV-G双质粒瞬时转染GP2-293包装细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染BHK-21细胞,嘌呤霉素持续筛选12d后获得阳性克隆,并用有限稀释法挑选单个阳性细胞克隆。【结果】应用PCR、RT-PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞中扩增到3D基因,证实目的外源基因能转录并被稳定整合进宿主细胞基因组中。经SDS-PAGE、Westernblot、间接免疫荧光检测到在不同代次的阳性细胞中有目的蛋白表达。【结论】本试验利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将外源基因插入到靶细胞的基因组中,构建了稳定表达口蹄疫病毒RNA聚合酶的包装细胞系,为研究3D基因表达及其蛋白定位提供了方便,也为下一步研究RNA聚合酶生物学功能和疫苗研制提供了科学依据.

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