番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测方法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 康华军

作者： 康华军;柴阿丽;石延霞;谢学文;袁军海;李宝聚

作者机构：

关键词： 番茄;细菌性斑点病菌;溃疡病菌;青枯病菌;疮痂病菌;四重PCR

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2018 年 11 期

页码： 2254-2264

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌(Pseudomonassyringae pv. tomato,Pst)、溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum,Rs)以及疮痂病菌(Xanthomonas campestris pv. vesicatoria,Xcv),建立了四重PCR检测技术,为病害的快速、准确诊断提供技术支持。根据gap1基因设计Pst特异性引物BW-F/BW-R,经PCR条件优化,扩增出了375bp的特异性片段。将设计的引物与已报道的3种细菌特异性引物组合,通过设定不同的退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响四重PCR扩增的因素,优化了其反应体系。四重PCR反应体系中的引物对BW-F/BW-R、Fan1/Fan2、RS-1-F/RS-3-R和XCVF/XCVR可分别扩增出细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为375、146、716和517bp的特异性目的片段,反应体系退火温度为57.1℃,4对引物的终浓度分别为0.24、0.16、0.16和0.08μmol·L~(-1),延伸时间45 s,35个循环。该四重PCR反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌,灵敏度达到10-1 ng·μL~(-1)。

分类号： S436.412

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