寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘长青

作者： 刘长青;张洪海;文杰;马月辉;关伟军;唐学玺

作者机构：

关键词： 寿光鸡;腺苷酸琥珀酸裂解酶;基因结构;基因表达;基因定位

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2009 年 40 卷 07 期

页码： 982-991

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL,利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞,并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测。结果表明:ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变,该突变使该位点变为核呼吸因子2(NRF-2)结合位点;经SDS-PAGE电泳显示,pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79,纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白。pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h,转染率在26.4%~41.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株,经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中,获得正常表达。研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构,研究其生物学功能奠定基础。

分类号： S831.2

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