猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂B6基因的鉴定、表达及抗原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘光学

作者： 刘光学;张少华;郭爱疆;侯俊玲;魏艳玲;王帅;骆学农

作者机构：

关键词： 猪带绦虫;Tsserpin B6;鉴定;表达;抗原性分析

期刊名称： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志

ISSN： 1000-7423

年卷期： 2016 年 34 卷 04 期

页码： 334-338+345

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的鉴定、表达猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin B6),探索其作为诊断抗原的可行性。方法利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计Tsserpin B6特异引物,RT-PCR扩增获得Tsserpin B6基因,对其DNA、氨基酸序列进行生物信息学分析,利用Clustal X1.83进行序列比对,并用MEGA6.0进行系统进化分析。构建pET-30a-Tsserpin B6重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。纯化表达的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),用猪囊尾蚴阳性血清进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定。结果Tsserpin B6开放阅读框为1 131 bp,编码376个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有serpin较为保守的反应中心环和特征性结构域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Tsserpin B6的表达产物相对分子质量(M_r)为53 000,主要以包涵体形式存在。Western blotting检测结果显示,所表达的蛋白可与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应,在M_r 53 000处产生特异条带。结论克隆了Tsserpin B6基因,其表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别。

分类号： R383.32

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