文献类型: 中文期刊
第一作者: 李江涛
作者: 李江涛;殷相平;张金卫;丁农;柳纪省
作者机构:
关键词: 狂犬病病毒G基因;N基因;内部核糖体进入位点序列;重组腺病毒
期刊名称: 浙江农业学报
ISSN: 1004-1524
年卷期: 2011 年 23 卷 03 期
页码: 489-494
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经KpnI和M luI,pIRES-N质粒经M luI、NotI双酶切,回收目的基因后与经KpnI和NotI双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在B J5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒,RT-PCR法检测狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法可检测到糖蛋白和核蛋白基因片段。试验成功构建了G和N双基因共表达重组腺病毒载体,为狂犬病活载体疫苗的研制提供了依据。
分类号: S852.655
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