小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周岩岩

作者： 周岩岩;李玲霞;吴锦艳;余树芳;李娇阳;刘丹;冯倩;孙晶晶;何苗;魏凡华;尚佑军

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫病毒;N基因;原核表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 010 期

页码： 1277-1282

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达.结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好.这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性.

分类号： S852.65

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