Taqman探针实时定量PCR检测猪伪狂犬病毒

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雪寒

作者： 张雪寒;何孔旺;缪文凯;茅爱华;俞正玉

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病毒;实时定量PCR;Taqman探针;定量检测

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2008 年 24 卷 04 期

页码： 66-69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 选取猪伪狂犬病毒(PRV)基因组中gE基因,设计特异性引物和Taqm an探针,利用实时定量PCR来定量检测PRV。利用PCR技术扩增猪伪狂犬病毒gE基因80 bp片段,并克隆到pMD18-T载体上,阳性重组质粒命名为pgE80。pgE80质粒进行10倍系列稀释,作为荧光PCR检测的标准模板,定量拷贝数,并绘制标准曲线。以提取的PRV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)的DNA作为模板,进行特异性检测。该实时定量PCR方法,标准曲线斜率为-0.37,R2=0.992,可以检测到20个拷贝数。PRV能被扩增出S型荧光曲线,而其它病毒均未能扩出。用PRV强毒肌肉注射仔猪,定量PCR比普通PCR更能灵敏而特异地检出呼吸道排毒和血液带毒。建立的实时定量PCR方法可用于临床样品快捷、准确、方便地检测。

分类号： S852.65

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