文献类型： 中文期刊
第一作者： 邱燕
作者： 邱燕;兰喜;李学瑞;殷相平;李宝玉;柳纪省;杨彬
作者机构：
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;短发夹RNA;腺相关病毒;GP5蛋白;M蛋白;双功能疫苗
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2013 年 05 期
页码： 480-487
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为研究新型猪繁殖与呼吸综合征疫苗,采用基因克隆技术将合成的特异性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RNA干扰寡核苷酸序列克隆至pAAV Helper-Free System中表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游,将PRRSV的ORF5、ORF6基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子下游,构建重组质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP-shRNA-ORF5-ORF6;将该质粒与系统中的控制质粒pAAV-RC、辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染293T细胞,包装得到表达PRRSV shRNA、GP5及M蛋白的重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6。原病毒液经分离纯化后,用点杂交法测定的重组病毒的物理效价高达1010copies/mL。Western-blot检测该重组病毒感染293T细胞后GP5、M蛋白的表达,并通过PRRSV抑制试验检测rAAV-shRNA-ORF5-ORF6的干扰作用。结果显示,成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,并能在体外表达GP5和M蛋白;rAAV-shRNA-ORF5-ORF6转导Marc145细胞后能够抑制PRRSV的复制。表明成功构建了重组腺相关病毒rAAV-shRNA-ORF5-ORF6,为新型猪繁殖与呼吸综合征双功能疫苗的研制奠定了基础。
分类号： S852.659.6
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