鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 江丹丹

作者： 江丹丹;林昶;黄志坚;肖世峰;王劭;林锋强;程晓霞;朱小丽;陈秀琴;董慧;陈少莺;陈仕龙

作者机构：

关键词： 鸭腺病毒B血清1型;鸭腺病毒B血清2型;fiber基因;fiber1基因;双重PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 008 期

页码： 855-860

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1).为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研 究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2fiber1基因序列特征,分别设计了 2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法.结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16 μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强.将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1fiber和DAdV-B2fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μ.L,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×101TCID50,敏感性较高.批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好.利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64).以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段.

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]鸭3型腺病毒的分离鉴定及其fiber基因分析. 程龙飞,刘荣昌,傅光华,施少华,万春和,陈红梅,傅秋玲,陈翠腾,黄瑜. 2019

[2]CELO病毒fiber1基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定. 王凤雪,王云峰,智海东,王玫,童光志. 2005

[3]双重PCR方法检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌. 杨万风,刘艳,陆辰晨,邵沛泽,谌运清,赵文军. 2018

[4]双重PCR法同步检测菜豆晕疫病菌和萎蔫病菌. 杨万风,刘艳,刘翔,邵沛泽,谌运清,赵文军. 2015

[5]双重PCR快速鉴别无乳链球菌和海豚链球菌. 黎炯,叶星,卢迈新,邓国成,田园园,江小燕,黎坚平. 2010

[6]羊源肠球菌属与屎肠球菌双重PCR检测方法的建立. 刘昆,凤英,高娃,杨斌,张月梅,宋越,陈伟,吴树清,赵世华. 2015

[7]绵羊肺炎支原体和山羊伪结核棒状杆菌双重PCR检测方法的建立及应用. 黄丽丽,林裕胜,肖义军,胡奇林. 2020

[8]鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立. 杨斌,朝洛门,陈志鹏,苏日娜,张月梅,宋越,萨娜,萨日盖,萨茹丽,赵世华. 2019

[9]牛诺如病毒及牛嵴病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用. 师志海,徐照学,兰亚莉,王文佳. 2020

[10]气单胞菌和嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立. 潘晓艺,沈锦玉,郝贵杰,姚嘉贇,徐洋,尹文林,孙逢明,吴颖蕾. 2011

[11]马铃薯腐烂茎线虫特异性分子检测技术研究. 彭德良,杨玉文,何月秋. 2008

[12]双重PCR检测马铃薯晚疫病菌和青枯病菌方法的建立及应用. 陈庆河,李本金,兰成忠,赵健,邱荣洲,翁启勇. 2009

[13]香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)特异性分子检测技术研究. 耿丽凤,张东升,彭德良. 2011

[14]鳜弹状病毒与传染性脾肾坏死病毒双重PCR检测方法的建立. 梁红茹,范芷仪,蔡秀珠,付小哲,林强,刘礼辉,黄志斌,牛银杰,林蠡,李宁求. 2020

[15]香蕉穿孔线虫(Radopholussimilis)特异性分子检测技术研究. 耿丽凤,张东升,彭德良. 2011

[16]空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立. 孙久鹤,郭东春,李安,刘家森,刘春国. 2016

[17]猪伪狂犬病病毒双重PCR鉴别方法的建立. 李艳,李段,向蓉,刘燕玲,蒋智勇,张乐宜,蔡汝健,李春玲. 2015

[18]一种产耐热蛋白酶假单胞菌双重PCR检测方法的建立. 牛春华,赵玉娟,高磊,段翠翠,李盛钰. 2015

[19]应用双重PCR方法对奶牛乳腺炎金葡菌溶血毒素进行分型. 王飞,刘代成,杨宏军,何洪彬,王长法,高运东,仲跻峰. 2010

[20]2型鲤疱疹病毒双重PCR快速检测方法的建立及应用. 罗丹,梁利国,谢骏,吴旭东. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序