银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）抗药性相关基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩红玉

作者： 韩红玉;姜连连;赵其平;董辉;陈兆国;林矫矫;黄兵

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;抗药性;银染mRNA差异显示;基因克隆

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2006 年 26 卷 4 期

页码： 369-372

收录情况： CSCD

摘要： 以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。

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