禽呼肠孤病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立及病毒组织分布比较研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 钟丽

作者： 钟丽;孙美玉;高立;刘永振;李凯;祁小乐;高玉龙;王笑梅

作者机构： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

关键词： 禽呼肠孤病毒;σC基因;Taqman RT-PCR;组织分布;致病性

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2017 年 25 卷 02 期

页码： 56-60

收录情况： 北大核心

摘要： 根据本实验室分离禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已发布ARV标准毒株σC基因序列比对结果,在保守区域设计1对引物和1条特异性TaqMan探针。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的Real-time RT-PCR在1×10~1~1×10~(10) copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10 copies/μL,是常规PCR方法的100倍。本研究建立的RTPCR与其他禽病病原无交叉反应,且批间与批内重复性试验变异系数分别小于1%和2%,表明该方法具有良好的特异性和重复性。将本实验室分离流行毒株MS01和标准毒株S1133感染SPF鸡后,利用建立的Real-time RT-PCR对ARV在鸡体内组织脏器的分布及病毒载量进行比较研究,结果表明,毒株MS01及S1133对SPF鸡的致死率分别为80%和46.7%,两株病毒均能在肝脏、脾脏、肺脏中有效复制,毒株MS01病毒载量明显高于毒株S1133,但与毒株S1133不同,毒株MS01在肾脏组织中也能有效复制。本研究不仅为禽呼肠孤病毒的诊断提供了技术手段,也有利于进一步探索流行毒株MS01高致病性的分子机制。

分类号： S852.659.4

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