尖孢镰刀菌Six1d启动子的克隆及其在真菌分泌表达载体构建中的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 彭存智

作者： 彭存智;常丽丽;王丹;黄超;徐兵强;仝征

作者机构：

关键词： 香蕉枯萎病;内源启动子;分泌表达载体;Six1d蛋白

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2023 年 44 卷 006 期

页码： 1203-1213

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 前期研究中构建的真菌分泌表达载体p74HSP-EGFP可在真菌中表达目标蛋白,在真菌侵染并定殖植物的过程中分泌目标蛋白到植物中,从而验证目的基因的功能,但p74HSP-EGFP载体中驱动目的基因表达的毒素基因(toxin A,ToxA)启动子不是尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)自身的启动子.为能在Foc中更有效地表达其自身基因,本研究从尖孢镰刀菌 1 号生理小种(Foc1)中克隆到高丰度表达的木质部分泌蛋白基因(secreted in xylem 1d,Six1d)的启动子,来替换p74HSP-EGFP载体中的ToxA启动子,并将新构建的真菌分泌表达载体命名为pSix1d74HSPG.为比较 2 个分泌载体的表达效率,本研究进一步将 p74HSP-EGFP 和 pSix1d74HSPG 载体转化尖孢镰刀菌热带 4 号生理小种(Foc TR4),获得的转化菌株分别在钾盐液体培养基(KK)中振荡培养 5 d后,检测分泌到胞外的EGFP荧光强度和EGFP蛋白的表达量.结果显示,pSix1d74HSPG中Six1d启动子驱动的EGFP表达强度能够达到p74HSP-EGFP中ToxA启动子驱动的 1.6~1.7 倍,说明pSix1d74HSPG载体可代替p74HSP-EGFP载体在Foc中更高效分泌表达目的蛋白,为香蕉枯萎病抗感病分子机理研究提供重要的实验工具.

分类号： S436.68

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