H7N9禽流感荧光报告病毒的构建及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于晓菲

作者： 于晓菲;万晓朋;李继清;姜永萍

作者机构：

关键词： H7N9;报告病毒;荧光蛋白

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 231-238

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为实现对H7N9禽流感病毒（AIV）感染过程的动态可视化示踪,本研究构建了重组报告质粒pHH21-NS-Venus、pHH21-NS-Apple 和包含 H7N9 AIV CK/SD008 株的 8 个基因节段的重组质粒 pHH21-PB2-627E、pHH21-PB2-627K（来自 CK/SD008-627K 株）、pHH21-PB1、pHH21-PA、pHH21-HA、pHH21-NA、pHH21-NP、pHH21-M。上述质粒均经测序鉴定。利用12质粒反向遗传操作系统,构建2株荧光报告病毒SD008-627EVenus、SD008-627E-Apple,及E627K 对哺乳动物嗜性的 2株荧光报告病毒 SD008-627K-Venus、SD008-627KApple。将这4株报告病毒感染A549细胞后在荧光显微镜下均可见相应荧光且病毒主要定位在细胞核中;将其中两株报告病毒SD008-627E-Venus/Apple经鸡胚传2代,2株SD008-627K-Venus/Apple在小鼠体内传3代后均感染A549细胞,经倒置荧光显微镜观察均可见相应荧光。上述结果表明4株报告病毒正确构建,且其可以在鸡胚或者小鼠体内传代（即SD008-627K-Venus/Apple为小鼠适应性报告病毒）。将4株报告病毒与亲本病毒分别感染C57BL/6小鼠,进行小鼠致病性试验。结果显示,报告病毒SD008-627E-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627E的MLD50均>5 log10EID50/mL,且均对小鼠不致死;报告病毒SD008-627K-Venus/Apple与其亲本病毒SD008-627K的MLD50 分别为1.6 log10EID50/mL、2.3 log10EID50/mL 和 1.8 log10EID50/mL;报告病毒 SD008-627E-Venus/Apple 与其亲本病毒SD008-627E感染小鼠的鼻甲、肺、脑、脾和肾的病毒滴度均<102 EID50/mL;SD008-627K-Venus/Apple及其亲本病毒SD008-627K的鼻甲和肺的病毒滴度均>106 EID50/mL,脑、脾和肾的病毒滴度均<102EID50/mL。上述结果表明,构建的4株报告病毒均未改变亲本病毒对小鼠的致病性。利用噬斑试验,将报告病毒SD008-627K-Venus感染MDCK细胞,结果可见其能够引起细胞病变和表达荧光蛋白且荧光斑数量与噬斑数量相近。分别将报告病毒SD008-627K-Venus感染小鼠,3 d后取其肺脏研磨后制备单细胞悬液,经流式细胞术检测肺脏细胞表面的CD45分子及CD11b分子。结果显示,SD008-627K-Venus主要感染实质细胞（CD45-）,很少感染免疫细胞（CD45+）;且小鼠肺部免疫细胞（CD45+）增多,其中趋化的免疫细胞中主要为单核巨噬细胞和中性粒细胞（CD11b+）。表明,报告病毒SD008-627K-Venus能够用于追踪小鼠体内病毒感染的细胞,并能够对感染细胞粗略分类。本研究构建了 4株H7N9报告病毒,可用于H7N9 AIV感染及致病机理相关的研究,为该类病毒的相关研究提供了有力工具。

分类号： S852.65

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