ER降解增强甘露糖苷酶样蛋白1抗H1N1亚型流感病毒感染机制的初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘晓阳

作者： 刘晓阳;赵济钰;孔晖晖;万晓朋

作者机构：

关键词： 内质网;ER降解增强甘露糖苷酶样蛋白1;流感病毒;非干扰素依赖机制

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2025 年 47 卷 008 期

页码： 773-779

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 内质网(ER)中的未折叠蛋白反应(UPR)能够激活ER相关蛋白降解通路(ERAD),从而清除错误折叠的蛋白;在ERAD途径中,ER降解增强甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)是核心调控蛋白,但其在病毒感染中的功能尚不清楚.为了探究EDEM1是否与流感病毒复制相关,本研究通过western blot检测C57BL/6小鼠主要脏器(肺、胸腺、脑、骨髓)中EDEM1的表达,结果显示,在小鼠肺及胸腺样品中均可检测到76 ku的EDEM1特异性条带,且其在肺部表达水平最高,其次为胸腺,而在脑和骨髓中未检测到.基于该结果,本研究构建了pLVX-EDEM1-puro重组质粒,并经菌落PCR与测序鉴定正确后,将该重组质粒利用慢病毒包装系统包装,获得慢病毒后感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达EDEM1的细胞系EDEM1-A549,该细胞系经western blot检测到EDEM1的表达,因此可用于后续流式细胞术、western blot及qPCR试验.为探究EDEM1的抗病毒机制,本研究通过流式细胞术检测EDEM1对表达GFP的H1N1亚型流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(简写为PR8-GFP)株感染率的影响;采用western blot检测EDEM1对细胞中干扰素信号通路中p-IRF3蛋白表达水平的影响,并通过qPCR检测EDEM1对IFN-β转录水平的影响.结果显示,过表达EDEM1能极显著抑制PR8-GFP流感病毒的感染率(P<0.0001),且EDEM1对细胞中p-IRF3蛋白的表达水平及IFN-β转录水平均无显著影响,表明其抗流感病毒作用不依赖于干扰素途径.在不同温度(4℃和37℃)下接种H1N1亚型流感病毒PR8至A549及EDEM1-A549细胞中,通过qPCR检测EDEM1对流感病毒感染阶段(吸附、内化与复制阶段)的影响,结果显示,在流感病毒PR8感染初期,EDEM1-A549细胞中病毒NP蛋白的转录水平与对照A549细胞无显著差异,而感染24h后,EDEM1-A549细胞中病毒NP蛋白的转录水平极显著低于A549细胞(P<0.0001),表明EDEM1不影响病毒的吸附及内化过程,而是影响病毒侵入细胞后的复制过程.本研究初步揭示了EDEM1抗H1N1亚型流感病毒感染的机制,为抗流感病毒研究提供了新的思路和潜在干预靶点.

分类号： S852.65

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