胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵济钰

作者： 赵济钰;王璐;孙婧;王春来;李刚;刘思国

作者机构：

关键词： 胸膜肺炎放线杆菌;MnmE基因;基因突变株

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 225-231

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了探究t RNA修饰酶Mnm E对胸膜肺炎放线杆菌（APP）生长特性及致病性的影响，本研究以血清7型APP S8株DNA为模板经PCR分别扩增其Mnm E基因的保守结构域及全长基因，分别构建重组质粒pmnm E及pls88-Mnm E，并经PCR鉴定正确后将重组质粒pmnm E通过接合转移方式导入受体菌S8中，利用氯霉素抗性筛选Mnm E基因缺失株（S8△Mnm E），并经PCR和测序鉴定；将重组质粒pls88-Mnm E电转化至S8△Mnm E感受态细胞中，经卡那抗性筛选Mnm E全长基因回补株（cS8△Mnm E），并经PCR和测序鉴定。将上述两株菌分别在无抗性培养基中传10代每代均经相应PCR鉴定其遗传稳定性。采用q RT-PCR检测Mnm E基因突变对其上下游基因转录水平的影响。结果显示，突变株S8△Mnm E和回补株cS8△Mnm E均正确构建，且遗传稳定性均较好；q RT-PCR结果显示，S8△Mnm E株Mnm E上下游基因的转录水平均与亲本株无明显差异。通过检测不同时间点的OD600nm值并绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株分别在20种不同氨基酸单独缺失培养基中的生长特性；通过微量结晶紫染色法，测定3株菌在不同培养时间生物被膜（BF）的形成能力；通过测定3株菌在不同浓度H2O2中的增殖能力，分析3株菌的体外抗氧化应激能力。结果显示，S8、S8△Mnm E及c S8△Mnm E株在含全部20种氨基酸的化学合成培养基中的增殖速度基本一致，但在谷氨酰胺（Gln）、色氨酸（Trp）、谷氨酸（Glu）缺失时，S8△Mnm E株的增殖水平明显低于亲本株，而在甲硫氨酸（Met）、赖氨酸（Lys）缺失时S8△Mnm E株的生长速度快于亲本株。培养36 h、48 h时各菌株BF的形成能力基本无差异，但在培养72 h时，S8△Mnm E株BF的形成能力约为亲本株的1.5倍（P＜0.001）；与S8株相比，S8△Mnm E株经不同浓度H2O2处理后的活菌数均明显降低，且降低水平与H2O2的浓度成正比。而回补株则基本恢复了亲本株的生长特性。通过对大蜡螟的致病性试验测定S8与S8△Mnm E的半数致死量(LD50)，结果显示S8的LD50为3.16×108cfu/mL,S8△Mnm E株的LD50为1.58×10~9cfu/mL，前者比后者升高约5倍。本研究结果首次表明Mnm E可参与APP BF的形成，并影响其体外抗氧化应激能力及调控APP生长，降低APP的致病性。为进一步阐明APP的致病机制提供参考依据。

分类号： S852.61

  • 相关文献

[1]猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶缺失株的构建. 张雪寒,何孔旺,周俊明,俞正玉,倪艳秀,陆承平. 2009

[2]基于同源重组的猪肺炎支原体p97基因突变株的构建. 韦艳娜,王吉英,谢欢,李志强,HASSAN Z.A.Ishag,谢星,徐彬,熊祺琰,冯志新,邵国青,于岩飞. 2025

[3]猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及自家疫苗的制备. 刘辉,田颖. 2005

[4]猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣA 2.5kb基因片段的分子克隆及其表达. 邵美丽,刘思国,王春来,郭洋,张秀华,佟恒敏,郭设平. 2005

[5]胸膜肺炎放线杆菌血清1型与5型基因组DNA差异基因的筛选与鉴定. 谢芳,韩文瑜,杜崇涛,周靓,杨舒心,雷连成. 2010

[6]猪场胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定、血清型鉴定及药敏试验. 袁芳艳,刘泽文,周丹娜,刘威,杨克礼,段正赢,郭锐,贝为成,阮征,田永祥. 2017

[7]胸膜肺炎放线杆菌在不同培养基中生长、生物膜形成及Apx毒素分泌能力的差异研究. 吕佩帅,张丽红,丁小松,郭芳芳,崔一芳,曹晓亚,徐福洲. 2022

[8]一例猪传染性胸膜肺炎的诊断及防治. 姜林林,宋帅,蔡汝健,蒋智勇,李艳,勾红潮,楚品品,李春玲,李冰. 2020

[9]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测. 李海利,冯丽丽,王英华,徐引弟,张青娴,王治方,朱文豪,许峰,游一,王克领. 2020

[10]胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的分子特征. 王春来,刘思国,邵美丽,宫强,郭设平,孔宪刚. 2005

[11]胸膜肺炎放线杆菌APXⅡA基因的克隆及序列测定. 赵卫平,逯忠新,陈振文,杨学山,赵萍,高鹏程,储岳峰. 2004

[12]胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的基因序列特征. 王春来,刘思国,邵美丽,宫强,郭设平,王勇. 2006

[13]猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌多重PCR检测方法的建立和应用. 孙学飞,倪艳秀,茅爱华,何孔旺. 2016

[14]利用CRISPR/Cas12a技术快速检测胸膜肺炎放线杆菌方法的建立. 栾天,龚俊,栾慧,刘文宇,杨亲,祝瑶,王春来,刘思国,张万江,李刚. 2021

[15]猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的间接EIJSA检测. 谢碧林,李超美,王芳,宋艳华,何孔旺. 2013

[16]高温高湿诱发猪传染性胸膜肺炎和链球菌混合感染的诊断. 徐民生,柯海意,杨冬霞,臧莹安,翟少伦,蒙嘉佳,张德泉,李春玲. 2022

[17]规模化猪场常见呼吸道细菌性病原的调查. 王治方,徐引弟,焦文强,朱文豪,张青娴,李海利,张立宪,白红杰,许峰,王克领,张彬,娄治国. 2023

[18]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达. 王芳,何孔旺. 2005

[19]构建胸膜肺炎放线杆菌apxIC基因插入突变株. 徐福洲,陈小玲,史爱华,杨兵,王金洛. 2008

[20]培养条件对胸膜肺炎放线杆菌生长的影响. 赵萍,逯忠新,储岳峰,高鹏程,贺英,石琴. 2008

作者其他论文 更多>>

微信小程序