实时荧光定量PCR筛选荷叶离褶伞的内参基因及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁力丹

作者： 梁力丹;李华君;兰玉菲;臧西哲;林嘉龙;韦勇琪;张佩锦;任鹏飞;孟丽

作者机构：

关键词： 荷叶离褶伞;内参基因;实时荧光定量PCR;稳定性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 32 卷 012 期

页码： 2915-2925

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 选择合适的内参基因是qRT-PCR的关键步骤，但关于荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)内参基因的筛选研究还尚未见报道。本研究以荷叶离褶伞的不同后熟时间(45, 55和65 d)、子实体不同发育时期(原基,幼菇,子实体)和不同菌盖形态(正常,畸形)为实验材料，选择在食用菌研究中6个常用的基因：细胞色素c氧化酶亚基1 (cytochrome c oxidase subunit 1, Cox1)、ATP酶(ATPase)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase, PGI)、蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A, PP2A)、DNA指导的RNA聚合酶亚基2 (DNA-directed RNA polymerase subunit 2, Rpb2)和泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,UBC)，以及4个鲜有报道的基因：含TCP1伴侣蛋白亚基-2 (chaperonin containing TCP1, subunit 2, CCT2)、细胞色素b560亚基(cytochrome b560 subunit, Cyb)、羟基类固醇17-β-脱氢酶3 (17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 3, HSD17B3)和铜/锌超氧化物歧化酶(copper/zinc superoxide dismutase, SODC)作为候选内参基因，并借助ΔCt、geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder五种算法程序评估10个候选内参基因的表达稳定性，并以β-1, 3葡聚糖酶为目的基因验证本研究筛选的内参基因。结果表明，HSD17B3在不同后熟时间和不同发育时期表达最稳定，Rpb2在不同菌盖形态中表达最稳定，而PP2A在不同后熟时间和不同菌盖形态中均最不稳定，在不同发育时期中，PGI的表达稳定性最差。本研究评估了荷叶离褶伞内参基因的稳定性，为荷叶离褶伞不同时期以及不同菌盖形态的研究提供参考。

分类号： S646

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