禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 乔彩霞

作者： 乔彩霞;关云涛;陈洪岩;刘怀然;蔡雪辉;李昌文;葛俊伟;刘家森

作者机构：

关键词： 禽白血病;禽劳斯肉瘤病毒;p27基因;克隆;表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 03 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT＿PCR方法扩增出720bp的gagP27基因片段,克隆至pMD18＿T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97 3%。将该片段亚克隆至pGEX＿6P＿1原核表达载体,转化受体菌BL＿21,经IPTG诱导表达,12%SDS＿PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明目的基因得到高效表达,所表达蛋白是大小为56kD的融合蛋白,占菌体总蛋白的23%。表达产物经GlutathionSpharose4B树脂亲和层析法纯化后,每100mL菌液最终可获得5mg重组P27蛋白,蛋白纯度在90%以上。用兔抗自然P27蛋白阳性血清进行Westernblot检测,表明重组P27蛋白有抗原反应活性。用纯化的重组P27蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应。所制备的重组P27蛋白和多克隆抗体将为禽白血病的诊断及ELISA试剂盒的研制奠定基础。

分类号： S852.65

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