TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黎明国

作者： 黎明国;李清春;陈鑫;卢世豪;何凡;祁梦凡;张化鹏;任玉军;张庆泽;符彬彬;徐梦思;艾子凯;闫坤;冯赟;华再东;黄涛;毕延震

作者机构：

关键词： 猪卵母细胞;TET去甲基化酶;甲基化;纺锤体;活性氧;线粒体膜电位

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 005 期

页码： 1907-1917

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研究TET（ten-eleven translocation）去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响。【方法】将收集的猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）置于不同浓度（0（对照组）、100、200和400μmol/L）Bobcat339抑制剂的体外成熟培养液中培养42 h,测量卵丘扩展直径，统计成熟率，确定最小有效浓度。在体外成熟培养液中培养27 h后，利用免疫荧光（IF）检测5-甲基胞嘧啶（5mC）与5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）信号强度以及纺锤体组装情况；利用DCFH-DA染料检测卵母细胞活性氧（ROS）水平；利用JC-1染色法检测线粒体膜电位水平（MMP）;利用ATP检测试剂检测卵母细胞ATP水平；利用实时荧光定量PCR检测42 h时COCs卵丘扩展相关基因表达水平和27 h时卵母细胞抗氧化相关基因表达水平。【结果】与对照组相比，100、200和400μmol/L组卵丘细胞扩展水平均极显著降低（P＜0.01）,100、200和400μmol/L组成熟率显著或极显著降低（P＜0.05;P＜0.01）,确定最小有效浓度为100μmol/L,后续试验均用该浓度。IF检测结果显示，与对照组相比，27 h时100μmol/L组卵母细胞中5mC信号强度显著升高（P＜0.05）,而5hmC信号强度没有显著降低（P＞0.05）。与对照组相比，27 h时100μmol/L组卵母细胞纺锤体排列紊乱，组装异常。与对照组相比，ROS水平极显著升高（P＜0.01）,MMP和ATP水平极显著降低（P＜0.01）。与对照组相比，42 h时100μmol/L组COCs中卵丘扩展相关基因透明质酸合成酶2（Has2）表达水平显著降低（P＜0.05）,穿透素3（Ptx3）基因表达量极显著降低（P＜0.01）,27 h时100μmol/L组卵母细胞中抗氧化相关基因超氧化物歧化酶1（Sod1）与Sod2表达水平显著降低（P＜0.05）。【结论】TET去甲基化酶通过清除猪卵母细胞中的5mC,降低ROS水平，提高MMP水平来指导纺锤体正常组装排列，维持COCs的正常扩展，保证猪卵母细胞正常成熟。

分类号： S828

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