文献类型： 中文期刊
第一作者： 刘星
作者： 刘星;罗霆宇;张玉;李凯丽;尹博曌;李昌文;夏长友;高彩霞
作者机构：
关键词： A群轮状病毒;塞内卡病毒;双重RT-qPCR检测方法建立及应用
期刊名称： 实验动物科学
ISSN： 1006-6179
年卷期： 2025 年 42 卷 003 期
页码： 30-37
摘要： 目的 建立A群轮状病毒（PoRVA）和塞内卡病毒（SVA）双重RT-qPCR检测方法，并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列，选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针，建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检测；取浓度为10～6～103 copies/μL 10倍系列稀释的重组质粒标准品，每个浓度做3个平行，重复检测3次，计算组内和组间变异系数，评估方法的重复性和稳定性；用建立的双重RT-qPCR检测方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》的检测方法进行比对，并检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品，评估该方法的实际应用性。结果 建立的双重RT-qPCR方法在10～9～10～1 copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系，PoRVA标准曲线Slope为-3.085,r2值为0.993,扩增效率为110.956%,SVA标准曲线Slope为-3.085,r2值为0.993,扩增效率为110.935%,可检测到的PoRVA和SVA最低限均为10～1 copies/μL;且与其他7种实验猪常见病原不发生交叉反应；重复检测10～6～103 copies/μL质粒标准品，组内变异系数小于0.15%,组间变异系数小于1.50%。用建立的双重RT-qPCR方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》方法检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品，结果显示，RT-qPCR检测出PoRVA阳性100%（50/50）,SVA阳性66%（33/50）,《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》检测阳性率100%（50/50）,《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》检测阳性率24%（12/50）,阳性符合率达到100%。结论 本研究建立的双重RT-qPCR检测方法可以有效地检测PoRVA和SVA,可为猪群的疫病检测和日常监测提供技术支撑。
分类号： S852.65
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