鲤浮肿病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 翟立文

作者： 翟立文;刘文枝;许晨;范玉顶;江南;周勇;曾令兵

作者机构：

关键词： 鲤浮肿病病毒;核蛋白编码基因P4a;环介导等温扩增;检测;优化

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2019 年 005 期

页码： 1004-1013

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究针对鲤浮肿病病毒(carp edema virus, CEV)基因组核蛋白编码基因P4a的序列,设计2对特异性引物,以克隆构建的重组质粒为标准模板,通过优化反应体系中引物浓度组合、Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度和扩增时间等参数,建立了CEV环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法.结果表明,CEV-LAMP方法的最佳反应温度为62℃,引物浓度组合为引物F3/B3 0.2μmol/L,引物FIP/BIP 1.2μmol/L, Betaine0.7 mol/L, Mg2+ 8.0 mmol/L, dNTPs 1.2 mmol/L,反应时间60 min.反应产物经凝胶电泳呈现梯型条带,添加SYBR Green I荧光染料后,呈现明显的绿色阳性反应.CEV-LAMP法灵敏度高,最低检测限为10 copies/μL,较常规PCR法灵敏度高100倍; CEV-LAMP法特异性强,与锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及鲤春病毒血症病毒(SVCV)无交叉反应.CEV-LAMP应用于患病鲤样本检测结果准确,简便快速,可为鲤浮肿病的现场诊断与防控提供技术支撑.

分类号： S943

  • 相关文献

[1]菜豆晕疫病菌环介导等温核酸扩增检测方法的建立. 杨万风,刘艳,刘翔,邵沛泽,谌运清,赵文军. 2014

[2]猪流感病毒LAMP检测方法的建立. 张莉,鄢明华,李秀丽,路超,王利丽,韩伟,孙英峰. 2014

[3]环介导等温扩增技术原理及其在农业中的应用. 蒋涛,曾光远,唐顺明,沈兴家. 2017

[4]RF-LAMP技术检测肉制品中沙门氏菌的研究. 徐慧,陈发荣,王保娟,王永,石磊,陈洵,常彦磊,时国强,张伟. 2018

[5]猪伪狂犬病病毒环介导等温扩增检测方法的建立. 张莉,鄢明华,王东,鲍士国,韩伟. 2011

[6]减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立. 董春娜,李刚,李伟,张坤,史利军,哈小琴,胡永浩. 2011

[7]转cry1Ac基因抗虫水稻环介导等温扩增检测方法的建立及应用. 李志辉,王志鑫,张先舟,张伟,檀建新,束长龙,张杰,张永军. 2013

[8]植物青枯菌LAMP检测方法的建立. 徐进,张昊,许景升,丁伟,冯洁. 2016

[9]牛副结核分枝杆菌LAMP快速检测方法的建立. 王建峰,黄素文,刘思国,倪建波,王春,张吉红,于纪棉,朱堂明,黄绍棠. 2012

[10]烟粉虱体内木尔坦棉花曲叶病毒的LAMP快速检测技术. 陈婷,齐国君,赵蕊,何自福,吕利华. 2016

[11]环介导等温扩增技术在转基因饲料成分检测中的应用. 田芳,王秀敏,滕达,杨雅麟,敖长金,王建华. 2010

[12]奥尔森帕金虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用. 曲朋,王崇明,任伟成,梁彦韬,贾志磊,黄倢,潘鲁青. 2012

[13]环介导等温扩增技术在转基因成分检测中的应用. 冀国桢,李刚,赵建宁,杨殿林,修伟明. 2016

[14]猪圆环病毒2型LAMP可视化快速检测方法的研究. 胡瑞丽,倪建平,赵笑,赵庆,史斌,赵桓震,赵斌安,赵凯. 2016

[15]逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究. 张吉红,余澍琼,徐瑛,张慧丽,陈先锋,陈剑平,陈炯. 2013

[16]温室能源管理系统研究进展. 孙俊林,曾成,张馨,郑文刚. 2017

[17]空肠弯曲菌环介导等温扩增检测方法的建立和优化. 许紫建,杨兵,苏霞,周宏专,史爱华,徐福洲. 2013

[18]基于Micro-CT的黄瓜苗坨夹取破损检测及取苗参数优化. 刘洋,毛罕平,韩绿化,徐静云,马国鑫,李亚雄. 2018

[19]应用RT-PCR方法检测桃和樱桃及其组培苗上的PNRSV和PDV. 侯义龙,张开春,杨俊玲. 2005

[20]羊口疮LAMP诊断方法的建立及其初步应用. 余波,洪开祥,谭诗文,冉懋韬,徐景峨,罗成波,洪开春. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序