山羊地方性鼻内肿瘤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李鹏飞

作者： 李鹏飞;高桂琴;周广青;吴锦艳;颜新敏;曹小安;何继军;袁莉刚;尚佑军

作者机构：

关键词： 山羊地方性鼻内肿瘤病毒;羊内源性逆转录病毒;TaqMan;荧光定量RT-PCR

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 2259-2266

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 山羊地方性鼻内肿瘤（enzootic nasal tumor, ENT）是山羊的病毒性传染病，由山羊地方性鼻内肿瘤病毒（enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2）所引起，感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变，已在世界范围内广泛存在，对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法，本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因（MT254061.1）保守区域设计引物和TaqMan探针，建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法，并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示，重组质粒标准品模板浓度为6.30×10~2～6.30×10~7 copies·μL-1呈现良好的线性关系，相关系数R~2为0.996 5,扩增效率为110%,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×10~1 copies·μL-1;组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好；与口蹄疫病毒(（foot-and-mouth disease virus, FMDV）、小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus, PPRV）、蓝舌病毒（bluetongue virus）、羊内源性逆转录病毒（endogenous retroviruses）等均无交叉反应，表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测，该方法较普通PCR方法的检出率更高。综上表明，本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法，为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

分类号： S858.27

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