非洲猪瘟病毒I226R蛋白原核表达及检测I226R抗体间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 柯军男

作者： 柯军男;张国军;岳慧贤;张艳艳;齐宇;蒋依倩;陈腾;李影;扈荣良

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;I226R蛋白;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 42 卷 012 期

页码： 2347-2355

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本实验室前期构建了缺失I226R基因的非洲猪瘟病毒(ASFV)减毒株SY18△I226R,将其高、低单剂量(分别为107TCID50和104TCID50)接种家猪21 d后,对致死剂量ASFV SY18毒株的攻击,免疫猪均能达到100%保护,具有作为ASF疫苗候选株的潜力.为了能够有效区别家猪感染ASFV野毒株和SY18△I226R减毒株,本试验从AS-FV SY18株基因组中扩增得到I226R基因片段,克隆到原核表达载体pET32a,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达,纯化后获得I226R蛋白(pI226R).以纯化的pI226R为包被抗原,以不同缺失毒免疫猪或自然毒感染康复猪血清为检测对象,建立了针对pI226R抗体的间接ELISA检测方法.结果显示,pI226R重组质粒在BL21(DE3)细胞中经IPTG诱导表达,获得的蛋白大小为28 kDa.以pI226R为包被抗原的间接ELISA检测结果显示,该方法对阴性猪血清和SY18△I226R疫苗候选株接种猪血清检测的D450nm值均≤0.381;ASFV自然感染猪血清和其他基因缺失株抗体水平的D450 nm值均>0.381,与其他ASFV抗体检测试剂盒如p30或p54等配合,可有效鉴别I226R基因缺失株接种和其他毒株感染,具有重要潜在应用价值.

分类号： S852.4%S852.65

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