腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王克坚

作者： 王克坚;Dhungyel Om;冯书章;吴广谋;杨海滨;Egerton JR;朱平;殷震

作者机构：

关键词： 腐蹄病;节瘤拟杆菌;纤毛蛋白;基因克隆

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 22-1234/S

年卷期： 2000 年 20 卷 04 期

页码： 362-366

收录情况： 北大核心

摘要： 用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8～ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western blot确证其为重组纤毛蛋白

分类号： S855.1

  • 相关文献

[1]节瘤拟杆菌结毛蛋白与绵羊IL2融合基因的克隆及其表达产物免疫原性试验. 王克坚,陈立志,刘晓颖,余兴龙,冯书章,殷震. 2000

[2]腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析. 苗利光,王克坚,刘艳环,陈立志,刘晓颖,徐敏,张洪涛. 2002

[3]腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定. 刘艳环,郑皓,苗利光,王克坚. 2004

[4]腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达. 刘艳环,苗利光,王克坚,刘波,李理. 2004

[5]节瘤拟杆菌PCR检测方法的建立. 邵西群,王克坚,陈立志,杨福合. 2005

[6]腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素－2融合基因表达载体的构建及表达. 王克坚,Dhungyel O,余兴龙,冯书章,赵宝华,Egerton J R,朱平,殷震. 2002

[7]腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因表达载体的构建及表达. 王克坚,Om Dhungyel,余兴龙,冯书章,赵宝华,JR Egerton,朱平,殷震. 2002

[8]节瘤拟杆菌PCR检测方法的初步应用. 邵西群,王克坚,陈立志,杨福合,闫庆友. 2006

[9]腐蹄病A型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析. 张洪涛,陈立志,苗立光,刘晓颖,王克坚. 2003

[10]腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建. 苗利光,王克坚,刘艳环,陈立志,刘晓颖,徐敏,张洪涛. 2002

[11]纤毛蛋白与绵羊白细胞介素2融合基因工程疫苗对实验动物的体液免疫应答. 王克坚,陈立志,刘晓颖,王克波,张洪涛,苗立光,徐敏. 2001

[12]节瘤拟杆菌K-凝集试验方法的建立. 刘晓颖,王克波,陈立志,王克坚,张洪涛,苗利光. 2005

[13]防腐蹄病山羊圈舍的设计要点. 黎俊,龚正发,陈虹,丁磊磊. 2016

[14]新疆石河子地区规模奶牛场腐蹄病情况调查与分析. 李平,林为民,孙新文,黄新. 2017

[15]奶牛腐蹄病综合防治措施. 李世宏,杨亚军,孔晓军,刘希望,秦哲,焦增华,李剑勇. 2017

[16]牛腐蹄病治疗技术简述～(18). 王贵波,郑继方,罗超应,李锦宇,谢家声,罗永江,辛蕊华. 2011

[17]腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达. 苗利光,王克坚,陈立志,刘晓颖,徐敏,刘艳环. 2002

[18]牛腐蹄病治疗技术研究进展. 郭妮妮,王贵波,潘浩. 2013

[19]坏死梭杆菌研究进展. 孟祥玉,佟盼盼,冯二凯,陈立志. 2017

[20]梅花鹿致病性源坏死梭杆菌的分离与鉴定. 孟祥玉,佟盼盼,冯二凯,陈立志. 2018

作者其他论文 更多>>

微信小程序