抗A型产气荚膜梭菌α毒素全人源单分子抗体的表达、纯化及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邱玥

作者： 邱玥;孙赫;王瑜;蔄弘扬;张国利;岳玉环;吴广谋;苏玉春

作者机构：

关键词： 产气荚膜梭菌α毒素;单分子抗体;基因克隆;亲和纯化

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2024 年 007 期

页码： 849-854

收录情况： CSCD

摘要： 目的表达及纯化抗A型产气荚膜梭菌α毒素的全人源单分子抗体，并进行鉴定，以期为防治该毒素引起的各类疾病奠定基础。方法将抗A型产气荚膜梭菌全人源单链抗体（single-chain fragment variable,Sc Fv）基因与人抗体轻、重链恒定区基因以不同组合方式连接，构建多种抗产气荚膜梭菌α毒素单分子抗体重组表达质粒，于感受态E.co Li BL21（DE3）中表达，间接ELISA法检测各单分子抗体的免疫结合活性。将免疫结合活性最大的单分子抗体表达产物通过Sepharo Se 4 FF及r Protein-A FF亲和层析进行纯化，纯化产物经12%SDS-PAGE分析。结果共构建5种重组表达质粒，分别为PTS-Sc Fv-CL-CH2-CH3、PTS-Sc Fv-CH2-CH3、PTS-Sc Fv-CL-CH2、PTS-Sc Fv-CH2、PTS-Sc Fv-CL，经E.coli BL21（DE3）表达后，获得相应单分子抗体，分别为Sc Fv-CL-CH2-CH3、Sc Fv-CH2-CH3、Sc Fv-CL-CH2、Sc Fv-CH2、Sc Fv-CL，其中单分子抗体Sc Fv-CH2-CH3的免疫结合活性最大，A450达3.9，远高于其他4种单分子抗体，浓度约为1 mg/m L，纯度约为86%。结论获得1株亲和力高、免疫原性低且具有内化活性的全人源单分子抗体Sc Fv-CH2-CH3，为治疗性抗体的进一步深入研究奠定了基础。

分类号： R392

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